L'étude des bactéries est d'une grande importance pratique pour l'homme. À ce jour, un grand nombre de procaryotes ont été découverts, qui diffèrent les uns des autres par leur pathogénicité, leur aire de distribution, leur forme, leur taille, leur nombre de flagelles et d'autres paramètres. Pour étudier cette souche en détail, une méthode de recherche bactériologique est utilisée.
Quelles sont les méthodes d'analyse des cellules bactériennes ?
Pour déterminer si les bactéries sont pathogènes, la culture est examinée de différentes manières. Parmi eux:
1. Méthode bactérioscopique.
2. Méthode bactériologique.
3. Méthode biologique.
Les méthodes de recherche bactérioscopiques et bactériologiques sont directement basées sur le travail avec des cellules procaryotes, lorsqu'une analyse biologique est nécessaire pour étudier l'effet de ces cellules sur l'organisme vivant d'animaux de laboratoire. Selon le degré de manifestation de certains signes de la maladie, le scientifique peut faireconclusion sur la présence ou l'absence de bactéries pathogènes dans l'échantillon, ainsi que de les propager naturellement dans le corps de l'animal pour obtenir leur culture et leur utilisation dans d'autres travaux.
La méthode de recherche bactériologique diffère de la bactérioscopique. Dans le premier, une culture spécialement préparée de procaryotes vivants est utilisée pour l'analyse, tandis que dans le second, le travail est effectué avec des cellules mortes ou vivantes sur une lame de verre.
Étapes de la méthode de recherche bactériologique. Microbiologie
Le principe d'étudier les propriétés d'une culture bactérienne peut être utile aussi bien pour les microbiologistes qui se sont fixé pour objectif d'étudier les cellules procaryotes, que pour les techniciens de laboratoire dont la tâche est d'établir la pathogénicité ou la non-pathogénicité des bactéries, et puis diagnostiquez le patient.
La méthode d'étude des bactéries est divisée en trois étapes:
1. Isolement des bactéries de l'échantillon d'origine.
2. Semer des bactéries et cultiver une culture pure, étudier ses propriétés.
3. Étude détaillée des cellules bactériennes.
Première étape
L'échantillon, ou frottis, est prélevé sur la surface libre du milieu ou sur le patient. Ainsi, on obtient un "cocktail" de plusieurs types de bactéries qu'il faut semer sur un milieu nutritif. Parfois, il devient possible d'isoler immédiatement les bactéries nécessaires, en connaissant leurs foyers de distribution dans le corps.
Après deux ou trois jours, les colonies souhaitées sont sélectionnées etsont ensemencés sur des milieux solides de boîtes de Pétri à l'aide d'une anse stérile. De nombreux laboratoires travaillent avec des tubes à essai, qui peuvent contenir des milieux nutritifs solides ou liquides. C'est ainsi que s'effectue la méthode bactériologique de recherche en microbiologie.
Deuxième étape
Après avoir obtenu des colonies individuelles de bactéries, une macro- et micro-analyse directe est effectuée. Tous les paramètres des colonies sont mesurés, la couleur et la forme de chacune d'elles sont déterminées. Il n'est pas rare de compter les colonies sur boîte de Pétri puis dans le matériel de départ. Ceci est important dans l'analyse des bactéries pathogènes, dont le nombre dépend du degré de la maladie.
La méthode de recherche bactériologique, dont la 2e étape consiste à étudier des colonies individuelles de micro-organismes, peut être associée à une méthode biologique d'analyse des bactéries. Un autre objectif de travailler à ce stade est d'augmenter la quantité de matériel source. Cela peut être fait sur un milieu nutritif, ou vous pouvez mener une expérience in vivo sur des organismes expérimentaux vivants. Les bactéries pathogènes se multiplieront et, par conséquent, le sang contiendra des millions de cellules procaryotes. Il est facile de préparer le matériel de travail nécessaire des bactéries à partir du sang prélevé.
Troisième étape
La partie la plus importante de l'étude est la détermination des propriétés morphologiques, biochimiques, toxigéniques et antigéniques de la culture bactérienne. Le travail est effectué avec des cultures pré-nettoyées sur un milieu nutritif, ainsi qu'avec des préparations (souvent colorées) sous microscope.
Définir la propriétébactéries pathogènes ou opportunistes à l'un ou l'autre groupe systématique, ainsi que pour déterminer leur résistance aux médicaments, permet la méthode de recherche bactériologique. Étape 3 - antibiotiques, c'est-à-dire analyse du comportement des cellules bactériennes dans les conditions du contenu des médicaments dans l'environnement.
L'étude de la résistance aux antibiotiques d'une culture est d'une grande importance pratique lorsqu'il est nécessaire de prescrire les médicaments nécessaires et surtout efficaces pour un patient particulier. C'est là que la méthode de recherche bactériologique peut aider.
Qu'est-ce qu'un milieu de croissance ?
Pour le développement et la reproduction, les bactéries doivent être dans des milieux nutritifs pré-préparés. Par consistance, ils peuvent être liquides ou solides, et par origine - végétale ou animale.
Exigences multimédias de base:
1. Stérilité.
2. Transparence maximale.
3. Indicateurs optimaux d'acidité, de pression osmotique, d'activité de l'eau et d'autres valeurs biologiques.
Obtenir des colonies isolées
1. Méthode Drygalsky. Il consiste en ce qu'un frottis avec différents types de micro-organismes est appliqué sur la boucle bactérienne. Cette boucle est passée le long de la première boîte de Pétri avec un milieu nutritif. De plus, sans changer la boucle, la méthode des matières résiduelles est effectuée sur les deuxième et troisième boîtes de Pétri. Ainsi, sur les derniers échantillons de la colonie, les bactéries ne seront pas ensemencées trop densément, simplifiant ainsi la possibilité de trouver celles qui sont nécessaires au travail.bactéries.
2. Méthode Koch. Il utilise des tubes à essai avec un milieu nutritif fondu. Une boucle ou une pipette avec un frottis de bactéries y est placée, après quoi le contenu du tube à essai est versé sur une plaque spéciale. L'agar (ou la gélatine) se solidifie au bout d'un certain temps, et il est facile de trouver les colonies cellulaires désirées dans son épaisseur. Il est important de diluer le mélange de bactéries dans les tubes à essai avant de commencer le travail afin que la concentration de micro-organismes ne soit pas trop élevée.
La méthode de recherche bactériologique, dont les étapes reposent sur l'isolement de la culture bactérienne recherchée, ne peut se passer de ces deux méthodes de recherche de colonies isolées.
Antibiogramme
Visuellement, la réaction des bactéries aux médicaments peut être observée de deux manières pratiques:
1. Méthode du disque papier.
2. Elevage de bactéries et d'antibiotiques dans un milieu liquide.
La méthode du disque papier nécessite une culture de micro-organismes qui ont été cultivés sur un milieu nutritif solide. Sur un tel support, posez quelques morceaux de papier arrondi imbibés d'antibiotiques. Si le médicament réussit à neutraliser les cellules bactériennes, après un tel traitement, il y aura une zone dépourvue de colonies. Si la réaction à l'antibiotique est négative, la bactérie survivra.
Dans le cas d'utilisation d'un milieu nutritif liquide, préparer d'abord plusieurs éprouvettes avec une culture de bactéries de différentes dilutions. Des antibiotiques sont ajoutés à ces tubes à essai et le processus d'interaction entre la substance et les micro-organismes est observé pendant la journée. En conséquence, un antibiogramme de haute qualité est obtenu, selon lequel il est possible dejuger de l'efficacité du médicament pour une culture donnée.
Tâches principales de l'analyse
Ici énumère les objectifs et les étapes de la méthode de recherche bactériologique.
1. Obtenir le matériel de départ qui sera utilisé pour isoler les colonies bactériennes. Il peut s'agir d'un frottis de la surface d'un objet, d'une membrane muqueuse ou d'une cavité d'un organe humain, d'un test sanguin.
2. Culture de la culture sur un milieu nutritif solide. Après 24 à 48 heures, des colonies de différents types de bactéries peuvent être trouvées sur la boîte de Pétri. Nous sélectionnons celui que vous souhaitez en fonction de critères morphologiques et / ou biochimiques et effectuons d'autres travaux avec lui.
3. Propagation de la culture résultante. La méthode de recherche bactériologique peut être basée sur une méthode mécanique ou biologique d'augmentation du nombre de cultures bactériennes. Dans le premier cas, le travail est effectué avec des milieux nutritifs solides ou liquides, sur lesquels les bactéries se multiplient dans un thermostat et forment de nouvelles colonies. La méthode biologique nécessite des conditions naturelles pour augmenter le nombre de bactéries, donc ici l'animal expérimental est infecté par des micro-organismes. Après quelques jours, de nombreux procaryotes peuvent être trouvés dans un échantillon de sang ou un frottis.
4. Travailler avec une culture purifiée. Pour déterminer la position systématique des bactéries, ainsi que leur appartenance aux agents pathogènes, il est nécessaire de procéder à une analyse approfondie des cellules en fonction des caractéristiques morphologiques et biochimiques. Lors de l'étude de groupes pathogènes de micro-organismes, il est important de savoirquelle est l'efficacité des antibiotiques.
C'était une caractéristique générale de la méthode de recherche bactériologique.
Caractéristiques de l'analyse
La règle principale de la recherche bactériologique est la stérilité maximale. Si vous travaillez avec des tubes à essai, les cultures et les sous-cultures de bactéries ne doivent être effectuées qu'au-dessus d'une lampe à alcool chauffée.
Toutes les étapes de la méthode de recherche bactériologique nécessitent l'utilisation d'une anse spéciale ou d'une pipette Pasteur. Les deux outils doivent être prétraités à la flamme d'une lampe à alcool. Comme pour la pipette Pasteur, ici, avant stérilisation thermique, il faut casser la pointe de la pipette avec une pince à épiler.
La technique d'ensemencement des bactéries a aussi ses propres caractéristiques. Tout d'abord, lors de l'ensemencement sur milieu solide, une boucle bactérienne est passée sur la surface de la gélose. La boucle, bien sûr, devrait déjà avoir un échantillon de micro-organismes à la surface. L'inoculation dans le milieu de culture est également pratiquée, auquel cas l'anse ou la pipette doit atteindre le fond de la boîte de Pétri.
Lorsque vous travaillez avec des milieux liquides, des tubes à essai sont utilisés. Ici, il est important de s'assurer que les liquides ne touchent pas les bords de la verrerie de laboratoire ou des bouchons, et que les instruments utilisés (pipette, anse) ne touchent pas de corps étrangers et de surfaces.
L'importance de la méthode de recherche biologique
L'analyse d'échantillons de bactéries a ses applications pratiques. Principalementla méthode de recherche bactériologique peut être utilisée en médecine. Par exemple, il est nécessaire d'étudier la microflore du patient afin d'établir le bon diagnostic, ainsi que de développer le bon traitement. Un antibiogramme aide ici, qui montrera l'activité des médicaments contre l'agent pathogène.
L'analyse des bactéries est utilisée en laboratoire pour détecter des maladies dangereuses telles que la tuberculose, la fièvre récurrente ou la gonorrhée. Il est également utilisé pour étudier la composition bactérienne des amygdales, des cavités d'organes.
La méthode de recherche bactériologique peut être utilisée pour déterminer la contamination de l'environnement. Selon les données sur la composition quantitative et qualitative d'un frottis de la surface d'un objet, le degré de population de cet environnement par des micro-organismes est déterminé.
