Le diagnostic de laboratoire de presque toutes les maladies infectieuses est basé sur la détection d'anticorps dans le sang du patient, qui sont produits contre les antigènes de l'agent pathogène, par les méthodes de réactions sérologiques. Ils sont entrés dans la pratique médicale de la fin du XIXe au début du XXe siècle.
Le développement de la science a aidé à déterminer la structure antigénique des microbes et les formules chimiques de leurs toxines. Cela a permis de créer des sérums non seulement thérapeutiques, mais aussi diagnostiques. Ils sont obtenus en administrant des agents pathogènes atténués à des animaux de laboratoire. Après plusieurs jours d'exposition, le sang de lapins ou de souris est utilisé pour préparer des préparations permettant d'identifier les microbes ou leurs toxines à l'aide de tests sérologiques.
La manifestation externe d'une telle réaction dépend des conditions de sa mise en place et de l'état des antigènes dans le sang du patient. Si les particules microbiennes sont insolubles, elles précipitent, lysent, se lient ou s'immobilisent dans le sérum. Si les antigènes sont solubles, alors le phénomène de neutralisation ou de précipitation apparaît.
Réaction d'agglutination (RA)
Le test sérologique d'agglutination est hautement spécifique. Il est facile à réaliser et assezvisuel, pour déterminer rapidement la présence d'antigènes dans le sérum sanguin du patient. Il est utilisé pour tester la réaction de Vidal (diagnostic de la fièvre typhoïde et paratyphoïde) et de Weigl (fièvre typhoïde).
Elle repose sur une interaction spécifique entre les anticorps humains (ou agglutinines) et les cellules microbiennes (agglutinogènes). Après leur interaction, des particules se forment qui précipitent. C'est un signe positif. Des agents microbiens vivants ou tués, des champignons, des protozoaires, des cellules sanguines et des cellules somatiques peuvent être utilisés pour déclencher la réaction.
Chimiquement, la réaction est divisée en deux étapes:
- Connexion spécifique des anticorps (AT) avec les antigènes (AG).
- Non spécifique - précipitation des conglomérats AG-AT, c'est-à-dire la formation d'agglutinats.
Réaction d'agglutination indirecte (IPHA)
Cette réaction est plus sensible que la précédente. Il est utilisé pour diagnostiquer les maladies causées par des bactéries, des parasites intracellulaires et des protozoaires. Il est si spécifique que même de très faibles concentrations d'anticorps peuvent être détectées.
Des érythrocytes de mouton purifiés et des globules rouges humains prétraités avec des anticorps ou des antigènes sont utilisés pour sa production (selon ce que le technicien de laboratoire veut trouver). Dans certains cas, les globules rouges humains sont traités avec des immunoglobulines. Les réactions sérologiques des érythrocytes sont considérées comme ayant eu lieu si elles se sont déposées au fond du tube. À propos d'une réaction positivedire quand les cellules sont disposées sous la forme d'un parapluie inversé, occupant tout le fond. Une réaction négative est comptée si les érythrocytes se sont déposés dans une colonne ou sous la forme d'un bouton au centre du fond.
Réaction de précipitation (RP)
Les réactions sérologiques de ce type sont utilisées pour détecter des particules d'antigènes extrêmement petites. Il peut s'agir, par exemple, de protéines (ou de parties de celles-ci), de composés de protéines avec des lipides ou des glucides, de parties de bactéries, de leurs toxines.
Les sérums pour la réaction sont obtenus en infectant artificiellement des animaux, généralement des lapins. Par cette méthode, vous pouvez obtenir absolument n'importe quel sérum précipitant. Le mécanisme d'action des réactions de précipitation sérologique est similaire à celui des réactions d'agglutination. Les anticorps contenus dans le sérum se combinent aux antigènes dans une solution colloïdale, formant de grosses molécules protéiques qui se déposent au fond du tube ou sur le substrat (gel). Cette méthode est considérée comme hautement spécifique et peut détecter même des quantités négligeables d'une substance.
Utilisé pour diagnostiquer la peste, la tularémie, l'anthrax, la méningite et d'autres maladies. De plus, il est impliqué dans un examen médico-légal.
Réaction de précipitation sur gel
Les réactions sérologiques peuvent être réalisées non seulement en milieu liquide, mais également en gel d'agar. C'est ce qu'on appelle la méthode de précipitation diffuse. Avec son aide, la composition de mélanges antigéniques complexes est étudiée. Cette méthode est basée sur la chimiotaxie des antigènes aux anticorps et vice versa. Dans un gel ils bougentl'un vers l'autre à des vitesses différentes et, se rencontrant, forment des lignes de précipitations. Chaque ligne est un ensemble d'AG-AT.
Réaction de neutralisation des exotoxines avec l'antitoxine (PH)
Les sérums antitoxiques sont capables de neutraliser l'action de l'exotoxine produite par les micro-organismes. Ces réactions sérologiques sont basées sur cela. La microbiologie utilise cette méthode pour titrer les sérums, les toxines et les anatoxines et déterminer leur activité thérapeutique. La puissance de neutralisation des toxines est déterminée par des unités conventionnelles - AE.
De plus, grâce à cette réaction, il est possible de déterminer l'espèce ou le type d'exotoxine. Ceci est utilisé dans le diagnostic du tétanos, de la diphtérie, du botulisme. L'étude peut être réalisée aussi bien "sur verre" que sur gel.
Réaction de lyse (RL)
Le sérum immunitaire, qui pénètre dans l'organisme du patient, a, en plus de sa fonction principale d'immunité passive, également des propriétés lysantes. Il est capable de dissoudre les agents microbiens, les éléments étrangers cellulaires et les virus qui pénètrent dans le corps du patient. Selon la spécificité des anticorps inclus dans le sérum, les bactériolysines, les cytolysines, les spirochétolizines, les hémolysines et autres sont isolés.
Ces anticorps spécifiques sont appelés "complément". Il se trouve dans presque tous les fluides corporels humains, a une structure protéique complexe et est extrêmement sensible à l'élévation de température, aux secousses, aux acides et à la lumière directe du soleil. Mais à l'état séché, il est capable de retenirses propriétés lysantes jusqu'à six mois.
Il existe ces types de réactions sérologiques de ce type:
- bactériolyse;
- hémolyse.
La bactériolyse est réalisée à l'aide du sérum sanguin du patient et d'un sérum immun spécifique avec des microbes vivants. Si suffisamment de complément est présent dans le sang, le chercheur verra la bactérie se lyser et la réaction sera considérée comme positive.
La deuxième réaction sérologique du sang est qu'une suspension de globules rouges du patient est traitée avec du sérum contenant des hémolysines, qui ne sont activées qu'en présence d'un certain complément. S'il y en a un, l'assistant de laboratoire observe la dissolution des globules rouges. Cette réaction est largement utilisée en médecine moderne pour déterminer le titre du complément (c'est-à-dire sa plus petite quantité qui provoque la lyse des érythrocytes) dans le sérum sanguin et pour effectuer une analyse de la fixation du complément. C'est ainsi qu'un test sérologique de la syphilis est effectué - la réaction de Wasserman.
Réaction de fixation du complément (CFR)
Cette réaction est utilisée pour détecter les anticorps dirigés contre un agent infectieux dans le sérum sanguin du patient, ainsi que pour identifier l'agent pathogène par sa structure antigénique.
Jusqu'ici, nous avons décrit des réactions sérologiques simples. La RSK est considérée comme une réaction complexe, car non pas deux, mais trois éléments y interagissent: anticorps, antigène et complément. Son essence réside dans le fait que l'interaction entre l'anticorps et l'antigènese produit uniquement en présence de protéines du complément, qui sont adsorbées à la surface du complexe AG-AT formé.
Les antigènes eux-mêmes, après addition du complément, subissent des modifications importantes, qui témoignent de la qualité de la réaction. Il peut s'agir de lyse, d'hémolyse, d'immobilisation, d'action bactéricide ou bactériostatique.
La réaction elle-même se déroule en deux phases:
- Formation d'un complexe antigène-anticorps qui n'est pas visuellement visible pour l'examinateur.
- Modification de l'antigène sous l'action du complément. Cette phase peut le plus souvent être tracée à l'œil nu. Si la réaction n'est pas visuellement visible, un système d'indicateur supplémentaire est utilisé pour identifier les changements.
Système d'indicateurs
Cette réaction est basée sur la fixation du complément. Des érythrocytes de bélier purifiés et du sérum hémolytique sans complément sont ajoutés au tube à essai une heure après le réglage du RSC. Si un complément non lié reste dans le tube à essai, il rejoindra le complexe AG-AT formé entre les cellules sanguines de mouton et l'hémolysine et les fera dissoudre. Cela signifie que RSK est négatif. Si les érythrocytes sont restés intacts, alors, en conséquence, la réaction est positive.
Test d'hémagglutination (RGA)
Il existe deux réactions d'hémagglutination fondamentalement différentes. L'un d'eux est sérologique, il sert à déterminer les groupes sanguins. Dans ce cas, les globules rouges interagissent avec les anticorps.
Et la secondela réaction ne s'applique pas à la sérologie, puisque les globules rouges réagissent avec les hémagglutinines produites par les virus. Étant donné que chaque agent pathogène n'agit que sur des érythrocytes spécifiques (poulet, agneau, singe), cette réaction peut être considérée comme hautement spécifique.
Vous pouvez savoir si une réaction est positive ou négative par l'emplacement des cellules sanguines au fond du tube à essai. Si leur motif ressemble à un parapluie inversé, alors le virus désiré est présent dans le sang du patient. Et si tous les érythrocytes se sont formés comme une colonne de pièces de monnaie, alors il n'y a pas d'agents pathogènes souhaités.
Test d'inhibition de l'hémagglutination (HITA)
Il s'agit d'une réaction hautement spécifique qui vous permet de déterminer le type, le type de virus ou la présence d'anticorps spécifiques dans le sérum sanguin du patient.
Son essence réside dans le fait que les anticorps ajoutés au tube à essai avec le matériel de test empêchent le dépôt d'antigènes sur les érythrocytes, arrêtant ainsi l'hémagglutination. Il s'agit d'un signe qualitatif de la présence dans le sang d'antigènes spécifiques pour le virus spécifique recherché.
Réaction d'immunofluorescence (RIF)
La réaction est basée sur la capacité à détecter les complexes AG-AT par microscopie fluorescente après leur traitement avec des colorants fluorochromes. Cette méthode est facile à manipuler, ne nécessite pas d'isolement de culture pure et prend peu de temps. Il est indispensable pour le diagnostic rapide des maladies infectieuses.
En pratique, ces réactions sérologiques se divisent en deux types: directes et indirectes.
Direct RIF est produit à partir deantigène, qui est prétraité avec du sérum fluorescent. Et l'indirect est que le médicament est d'abord traité avec un diagnostic conventionnel contenant des antigènes pour les anticorps d'intérêt, puis le sérum luminescent, spécifique des protéines du complexe AG-AT, est réappliqué et les cellules microbiennes deviennent visibles au microscope.
