Récemment, une méthode fiable, très sensible et rapide pour diagnostiquer diverses maladies infectieuses humaines a été développée. Cette méthode est appelée "analyse PCR". Qu'est-ce que c'est, quelle est son essence, quels micro-organismes peut-il révéler et comment le prendre correctement, nous le dirons dans notre article.
Historique des découvertes
Inventé la méthode de réaction en chaîne par polymérase (PCR) par le scientifique américain Kary Mullis en 1983. Initialement, la méthode de diagnostic a été brevetée par la Cetus Corporation, dans laquelle travaillait son créateur. Mais en 1992, tous les droits et brevets ont été vendus à Hoffman-La Roche. Après cela, il s'est avéré que des études similaires ont été menées en parallèle et ont été enregistrées par d'autres biologistes américains, tels qu'Alice Chen, David Edgar, John Trell. En 1980, les scientifiques soviétiques A. Slyusarenko, A. Kaledin et S. Gorodetsky ont également traité ce problème. Par conséquent, il était impossible de déterminer l'unique titulaire du droit d'auteur. De nombreux biochimistes éminents ont apporté une certaine contribution au développement de la technique de réaction en chaîne par polymérase et ont breveté leurs innovations. A l'heure actuelle, l'analyseLa PCR est pratiquée partout dans des laboratoires spécialement équipés.
L'essence de la méthode de diagnostic PCR
Analyse PCR: qu'est-ce que c'est et comment ça marche ? L'essence de la méthode est d'augmenter le volume d'un certain environnement microbien dans des conditions artificielles en utilisant une enzyme spéciale ADN polymérase. Pour cela, le matériel ADN existant est multiplié plusieurs fois. Ainsi, en présence d'un micro-organisme pathogène dans l'échantillon, sa quantité sera augmentée en raison de manipulations biochimiques en laboratoire, et il ne sera pas difficile de détecter la bactérie au microscope.
Comment se fait la recherche matérielle ?
Requis pour l'analyse:
- matrice ADN;
- amorces reliant les extrémités d'un morceau de matériau;
- enzyme ADN polymérase résistante à la chaleur;
- produits chimiques qui font fonctionner correctement les enzymes;
- solution tampon nécessaire pour créer les conditions appropriées pour la croissance et le développement du matériel ADN.
Pour effectuer la PCR, 25 à 30 répétitions sont effectuées, composées de trois étapes: dénaturation, annelage et élongation.
Pour l'analyse de la réaction en chaîne du polymère, un appareil spécial est utilisé - un amplificateur. L'équipement moderne vous permet de définir le programme nécessaire pour les tubes de chauffage et de refroidissement afin d'éliminer les erreurs lors du diagnostic.
Où les diagnostics sont-ils utilisés ?
La méthode de réaction en chaîne des polymères est utilisée dans divers domaines de la médecine:
- criminels avecil identifie le matériel génétique tel que les cheveux, la salive ou le sang;
- Le test sanguin PCR aide au génotypage, par exemple, pour détecter une réaction génétiquement inhérente à un certain médicament;
- utiliser cette méthode pour établir la présence de liens familiaux entre des personnes;
- La méthode PCR la plus populaire est devenue dans le diagnostic médical pour déterminer diverses maladies infectieuses.
Quelles infections la PCR détecte-t-elle ?
Ainsi, la médecine utilise depuis longtemps et avec succès l'analyse PCR. Qu'est-ce que c'est, nous le savons déjà. Et quels agents pathogènes peuvent être détectés avec ? Les maladies infectieuses suivantes sont diagnostiquées par la méthode PCR:
- hépatite A, B, C;
- uréeplasmose;
- candidose;
- chlamydia;
- mycoplasmose;
- gardnerellose;
- mononucléose infectieuse;
- trichomonase;
- infection à papillomavirus;
- tuberculose;
- herpès types 1 et 2;
- hélicobactériose;
- cytomégalovirus;
- diphtérie;
- salmonellose;
- Infection par le VIH.
De plus, les méthodes PCR sont utilisées dans le diagnostic du cancer.
Bénéfices de la méthode
Le diagnostic PCR présente plusieurs avantages:
- Haute sensibilité. Même en présence de seulement quelques molécules d'ADN de micro-organisme, l'analyse par PCR détermine la présence d'une infection. La méthode aidera avec les maladies chroniques et latentes. Souvent, dans de tels cas, le micro-organismeest autrement incultivable.
- Tout matériel convient à la recherche, comme la salive, le sang, les sécrétions génitales, les cheveux, les cellules épithéliales. La plus courante est l'analyse du sang et des frottis urogénitaux pour la PCR.
- Aucune culture à long terme requise. Le processus de diagnostic automatisé vous permet d'obtenir les résultats de l'étude après 4 à 5 heures.
- La méthode est fiable à presque 100 %. Seuls des cas isolés de résultats faussement négatifs ont été enregistrés.
- La capacité d'identifier plusieurs types d'agents pathogènes à partir d'un seul échantillon de matériau. Cela accélère non seulement le processus de diagnostic de la maladie, mais réduit également considérablement les coûts matériels. Souvent, le médecin prescrit une analyse PCR complète. Le prix de l'examen, qui consiste en la détermination de six agents pathogènes, est d'environ 1 500 roubles.
Recommandations pour la préparation de l'analyse
Pour que les résultats soient fiables lors de l'étude PCR, vous devez passer le test en suivant les recommandations de préparation préalable au diagnostic:
- Avant de faire un don de salive, vous devez vous abstenir de manger et de prendre des médicaments 4 heures avant le prélèvement. Immédiatement avant la procédure, rincez-vous la bouche avec de l'eau bouillie.
- Les règles ci-dessus doivent également être suivies lors du prélèvement d'un échantillon de la surface interne de la joue. Après rinçage, il est recommandé d'effectuer un léger massage de la peau pour mettre en évidence la sécrétion de la glande.
- L'urine est généralement collectée à domicile. Pour ce faire, vous devez effectuer une toilette approfondieorganes génitaux. Recueillir 50 à 60 ml d'urine dans un récipient en plastique stérile. Pour garantir la pureté du matériau, il est recommandé aux femmes d'insérer un tampon dans le vagin et aux hommes de retirer le pli cutané autant que possible. Ne faites pas de don pendant vos règles.
- Pour faire un don de sperme, vous devez vous abstenir de tout rapport sexuel pendant 3 jours avant le prélèvement. Les médecins déconseillent également de se rendre au sauna et de prendre un bain chaud, de boire de l'alcool et des aliments épicés. Vous devez vous abstenir d'uriner 3 heures avant le test.
- Pour faire un frottis urogénital, par exemple, si un test PCR est effectué pour la chlamydia, il est conseillé aux femmes et aux hommes de se reposer pendant 3 jours. Les médicaments antibactériens ne doivent pas être pris 2 semaines avant l'analyse. Pendant une semaine, vous devez arrêter d'utiliser des gels intimes, des pommades, des suppositoires vaginaux, des douches vaginales. 3 heures avant l'examen, vous devez vous abstenir d'uriner. Pendant la menstruation, aucun prélèvement n'est effectué, seulement 3 jours après l'arrêt de l'écoulement sanguin, vous pouvez effectuer un frottis urogénital.
PCR pendant la grossesse
Pendant la période d'attente du bébé, de nombreuses infections sexuellement transmissibles sont extrêmement dangereuses pour le développement normal du fœtus. Les MST peuvent provoquer un retard de croissance intra-utérin, une fausse couche ou un accouchement prématuré, des malformations congénitales de l'enfant. Par conséquent, il est extrêmement important de subir un examen PCR en début de grossesse. Il est nécessaire de réussir l'analyse lors de l'inscription - jusqu'à 12 semaines.
Le matériau est prélevé du canal cervical à l'aide d'une brosse spéciale. La procédure est indolore et ne présente aucun danger pour le bébé. Habituellement pendant la grossesse, une analyse est effectuée pour la chlamydia par la méthode PCR, ainsi que pour l'uréeplasmose, la mycoplasmose, le cytomégalovirus, l'herpès, le papillomavirus. Un tel complexe d'examens est appelé PCR-6.
PCR pour le diagnostic du VIH
En raison du fait que la méthode de réaction en chaîne par polymérase est très sensible aux changements dans le corps et aux conditions du diagnostic, de nombreux facteurs peuvent affecter le résultat. Par conséquent, l'analyse PCR pour l'infection par le VIH n'est pas une méthode fiable, son efficacité est de 96 à 98 %. Dans les 2 à 4 % de cas restants, le test donne des résultats faussement positifs.
Mais dans certaines situations, le diagnostic PCR du VIH est indispensable. Il est généralement administré aux personnes dont le résultat ELISA est faux négatif. De tels indicateurs indiquent qu'une personne n'a pas encore développé d'anticorps contre le virus et qu'ils ne peuvent pas être détectés sans une augmentation multiple du nombre. C'est exactement ce que l'on peut obtenir en effectuant un test sanguin PCR.
Ces diagnostics sont également nécessaires pour les enfants de la première année de vie nés d'une mère séropositive. La méthode est le seul moyen de déterminer de manière fiable le statut d'un enfant.
PCR pour diagnostiquer l'hépatite
La méthode de réaction en chaîne par polymérase permet de détecter l'ADN du virus de l'hépatite A, B, C bien avant la formation d'anticorps contre l'infection ou l'apparition des symptômes de la maladie. L'analyse PCR de l'hépatite C est particulièrement efficace, puisque dans 85% des cas cette maladie est asymptomatique et sansun traitement rapide entre dans la phase chronique.
La détection rapide de l'agent pathogène aidera à éviter les complications et le traitement à long terme.
Examen PCR complet
Analyse PCR complexe: qu'est-ce que c'est ? Il s'agit d'un examen utilisant la méthode de réaction en chaîne polymérique, qui comprend la détermination simultanée de plusieurs types d'infections: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomégalovirus, ureaplasma urealiticum, herpès types 1 et 2, gonorrhée, papillomavirus. Le prix de ces diagnostics varie de 2000 à 3500 roubles. en fonction de la clinique, des matériels et équipements utilisés, ainsi que du type d'analyse: qualitative ou quantitative. Ce qui est nécessaire dans votre cas - le médecin décidera. Dans certains cas, il suffit de déterminer la présence de l'agent pathogène, dans d'autres, par exemple, avec l'infection par le VIH, un titre quantitatif joue un rôle important. Lors du diagnostic de tous les agents pathogènes ci-dessus, l'examen est appelé "analyse PCR-12".
Transcription des résultats d'analyse
Déchiffrer l'analyse PCR n'est pas difficile. Il n'y a que 2 échelles de l'indicateur - "résultat positif" et "résultat négatif". Lorsqu'un agent pathogène est détecté, les médecins peuvent confirmer la présence de la maladie avec une certitude de 99 % et commencer à traiter le patient. Avec une méthode quantitative de détermination de l'infection, la colonne correspondante indiquera l'indicateur numérique des bactéries détectées. Seul un médecin peut déterminer l'étendue de la maladie et prescrire le traitement nécessaire.
Dans certains cas, par exemple, lors de la détermination de l'infection par le VIH par PCR, avec un résultat négatif, il devient nécessaire de procéder à des examens supplémentaires pour confirmer les indicateurs obtenus.
Où se faire tester ?
Où passer un test PCR: en clinique publique ou en laboratoire privé ? Malheureusement, dans les établissements médicaux municipaux, le matériel et les méthodes sont souvent dépassés. Par conséquent, il est préférable de privilégier les laboratoires privés dotés d'équipements modernes et d'un personnel hautement qualifié. De plus, dans une clinique privée, vous obtiendrez des résultats beaucoup plus rapidement.
À Moscou, de nombreux laboratoires privés proposent des analyses PCR pour diverses infections. Par exemple, dans des cliniques telles que Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, une analyse PCR est effectuée. Le prix de l'examen est de 200 roubles. pour identifier un agent pathogène.
On peut conclure que le diagnostic des maladies infectieuses par PCR est dans la plupart des cas un moyen rapide et fiable de détecter l'agent pathogène dans le corps aux premiers stades de l'infection. Mais encore, dans certains cas, il vaut la peine de choisir d'autres méthodes de diagnostic. Seul un spécialiste peut déterminer la nécessité d'une telle étude. Déchiffrer l'analyse PCR nécessite également une approche professionnelle. Suivez les conseils de votre médecin et ne faites pas de tests dont vous n'avez pas besoin.
