Méthode colorimétrique - une analyse basée sur une comparaison de la saturation des couleurs des substances étudiées et connues. Les résultats des tests physiques et chimiques sont d'une grande valeur pour de nombreuses branches de la science, mais la plupart de toutes les recherches sont utilisées en médecine.
L'essence de la méthode colorimétrique
Il existe de nombreux types de tests qui déterminent la composition chimique des substances. Certains d'entre eux sont universels et largement utilisés dans divers domaines, d'autres sont spécifiques, avec une plus grande précision. La méthode colorimétrique est universelle.
L'essence de l'analyse réside dans le fait que la saturation de la couleur d'une solution de concentration inconnue est comparée à la couleur d'une solution standard. Au cours de l'analyse, à la suite de l'interaction du composant étudié avec un certain réactif, un composé coloré se forme. Une fois la réaction terminée, la teinte obtenue est comparée à la couleur des solutions, dont la concentration est déjà connue.
On pense que le fondateur de la colorimétrie est Robert Boyle. Il a utilisé la pressiontanins pour distinguer le fer du cuivre en solution. C'est Boyle qui a remarqué que plus la concentration de fer dans la solution était élevée, plus la tonalité de celle-ci était riche.
Colorimétrie
La colorimétrie est une méthode permettant de déterminer la quantité d'une substance dans des solutions. L'analyse est basée sur la loi de Bouguer-Lambert-Beer: lorsqu'un faisceau lumineux frappe une couche absorbante dense d'une substance, son intensité s'affaiblit.
La méthode colorimétrique pour déterminer la concentration d'une substance peut utiliser une comparaison visuelle ou une comparaison à l'aide d'instruments spéciaux pour mesurer l'intensité de la couleur. La comparaison est faite de manière directe et compensatoire.
- Hétéro. La méthode consiste à comparer le niveau de couleur de la solution d'essai à une certaine densité et température du liquide avec une solution de référence. Lors de l'utilisation de photocolorimètres et de spectrophotomètres, l'eau distillée est utilisée comme solution de référence. Les appareils mesurent l'intensité du courant, qui dépend de l'intensité de la lumière.
- Compensatoire. La méthode est basée sur le rapprochement de la couleur de l'échantillon étudié avec celle de référence. Le résultat est obtenu en ajoutant un solvant ou en augmentant la hauteur de la couche du milieu teinté.
L'utilisation d'un spectrophotomètre, d'un monochromateur et d'autres instruments de précision simplifie encore la méthode de recherche déjà simple et vous permet d'augmenter la précision des résultats. Ces appareils sont capables de mesurer la quantité de lumière transmise et de déterminer la longueur d'onde.
Où l'analyse est appliquée
La méthode d'analyse colorimétrique est utilisée lorsque la composition chimique exacte est connue, qu'il existe un échantillon de référence pour comparaison et que la température de l'échantillon de test et de référence est la même. Si vous avez besoin de déterminer rapidement la quantité d'une substance colorée, mais qu'elle est si petite qu'il est impossible d'appliquer la méthode analytique.
La colorimétrie est largement utilisée en médecine pour la recherche biochimique clinique et dans d'autres domaines:
- industrie pharmaceutique;
- industrie alimentaire et de l'alcool;
- agronomie (détermination de la qualité du sol).
Pour et contre
La méthode colorimétrique, comme toutes les autres, a des avantages et des inconvénients.
Les avantages sont les suivants:
- facilité d'analyse, procédures préparatoires minimales;
- possibilité de tester même avec une petite quantité de matériel de test;
- il n'y a pas besoin d'équipement coûteux, bien que les appareils modernes qui ne sont pas bon marché soient de plus en plus utilisés ces derniers temps. Mais ils fournissent le résultat le plus précis.
Inconvénients: faible précision d'analyse par rapport aux méthodes analytiques.
Méthode Biuret pour la détermination des protéines
La protéine dans le sérum sanguin est un indicateur reflétant l'état de l'homéostasie. Une augmentation de la concentration d'un composé macromoléculaire dans le sang est appelée hyperprotéinémie, une faible teneur est appelée hypoprotéinémie.
Protéines dansle sérum sanguin a une composition, une structure, des propriétés différentes, remplit des fonctions différentes. Ils sont divisés en enzymes, hormones, immunoglobulines et autres. Tous les groupes de protéines ont un certain nombre de caractéristiques communes, sur la base desquelles des méthodes ont été développées pour la détermination des composés organiques macromoléculaires dans les fluides biologiques.
De toutes les méthodes de biochimie clinique, les méthodes colorimétriques de détermination des protéines sont les plus utilisées. Ils sont relativement bon marché, ce qui est important pour les organisations budgétaires. et sont assez simples. La plus courante est la méthode du biuret. L'essence de la méthode: les protéines dans un environnement alcalin réagissent avec le sulfate de cuivre et forment des composés violets. La teneur en protéines dans le sang est déterminée par la saturation de la coloration. Le biomatériau à analyser est prélevé le matin à jeun.
L'analyse est très précise, mais certains facteurs affectent la concentration de protéines dans le sang:
- activité physique juste avant le prélèvement de biomatériaux;
- dernières semaines de grossesse et d'allaitement;
- l'utilisation des médicaments Corticotropin, Miscleron, Clofibrate augmente la teneur en protéines dans le sang, et l'utilisation de Pyrazinamide et d'œstrogènes - pour réduire la concentration;
- mauvaise position de la main lors de l'échantillonnage de biomatériaux.
Détermination du fer
La quantité de fer dans le sang est l'un des principaux indicateurs dans le diagnostic de diverses maladies. La substance est concentrée en hémoglobine, qui assure le transport de l'oxygène vers les tissus. Pourdétermination du fer par la méthode colorimétrique, le plus souvent, une solution de bathophénanthroline (0,02%) est utilisée comme réactif principal. Biomatériau - sérum sans traces d'hémolyse.
L'essence de la méthode: l'interaction des ions ferreux et de la bathophénanthroline sulfatée forme un complexe coloré dont la saturation est déterminée par photométrie. Pour obtenir une solution claire, il est nécessaire de suivre les règles d'échantillonnage du biomatériau, mais pour déterminer avec précision les densités optiques des complexes fer-ligand, le fer est libéré de l'hémoglobine à l'aide d'hydroxylamine et de détergents (dodécylsulfate de sodium). Le résultat du test détermine la présence et le degré de pathologie. La concentration normale de fer devrait être:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (hommes);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (femmes).
La carence en fer est généralement associée à une perte de sang, à un apport alimentaire insuffisant ou à une mauvaise absorption par le tractus gastro-intestinal.
Test de cholestérol
Le cholestérol est une substance organique présente dans la paroi cellulaire de nombreux organismes, y compris les humains. Il est nécessaire à la production de cholécalciférol et d'hormones stéroïdes. Un taux de cholestérol de 3,37 à 5,2 mmol/L est considéré comme normal. Un contenu élevé est l'une des principales causes de l'athérosclérose.
Les méthodes colorimétriques pour déterminer le cholestérol vous permettent de reconnaître les maladies vasculaires à un stade précoce. Selon les résultats pathoanatomiques de l'issue mortelle de l'ischémie, la concentration d'alcool lipophile chez les patientsétait de 6,5 à 7,8 mmol/L.
Le principe de la méthode colorimétrique est que le cholestérol est oxydé par la 3beta-hydroxy-stéroïde oxydoréductase, libérant du peroxyde d'hydrogène, qui convertit la p-aminoatipyrine en un composé coloré. La teneur en cholestérol est déterminée par la saturation de sa couleur.
Lors de la réalisation d'un test chez un enfant, il faut tenir compte du fait que la concentration de cholestérol chez l'enfant ne doit pas dépasser 4,1 mmol / l.
Qu'est-ce que la méthode colorimétrique enzymatique ?
Les tests enzymatiques sont basés sur l'utilisation de réactions par des enzymes à haute activité. Ils sont largement utilisés en chimie analytique pour déterminer diverses substances - des ions nitrates aux macromolécules.
Les méthodes enzymatiques (enzymatiques) sont spécifiques, permettant l'analyse de certaines substances en présence d'autres substances de composition similaire. Les méthodes les plus courantes basées sur l'utilisation de l'enzyme - glucose oxydase. Le test est utilisé pour déterminer la concentration de glucose dans le sang. La précision du test permet de l'utiliser pour ajuster la posologie des agents hypoglycémiants chez les patients atteints de diabète de type 2.
La méthode des oxydants de glucose est considérée comme l'une des meilleures méthodes quantitatives pour déterminer le glucose. Le sang (capillaire) et le sérum peuvent être utilisés comme biomatériau, mais le plasma est préférable car il a une teneur en hématocrite plus faible, ce qui affecte négativement la précision du résultat.
La méthode cinétique de photométrie est principalement utilisée. Son essence réside dans le fait quele rapport établi de glucose oxydase et de peroxydase, pendant un certain temps après le début de la réaction, la vitesse de formation d'un composé coloré sera proportionnelle au niveau de glucose dans l'échantillon. Le principal avantage du test est que le résultat n'est pas affecté par la présence de composés tiers dans l'échantillon. La méthode présente également un inconvénient - des instruments de mesure coûteux de fabricants allemands ou suédois sont nécessaires pour le test.
Conclusion
La méthode colorimétrique est précise et facile à utiliser. Son utilisation en médecine permet une détection précoce de divers changements pathologiques dans le corps. Avec l'introduction de nouvelles technologies, la méthode s'améliore et devient de plus en plus populaire.
